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芍药在中国是重要的观赏花卉,同时其根也是重要的中药材质料。根据现代药理学分解,芍药根中的药理活性因素重要是单帖苷类化合物,单宁类化合物和丹皮酚类化合物,重要成果有抗炎、免疫调治、抗癌、抗病毒、抗细菌、抗真菌、保护肝脏和保护神经系统等作用。根据《中华人民共和国药典》(2015版)(以下简称《药典》)划定,只有芍药(Paeonia lactiflora)和川赤芍(P. anomala subsp. veitchii)的根可以作为‘赤芍’使用,但市场上存在野生芍药被采挖作为‘赤芍’出售的现象。现在,还没有关于中国原产的芍药野生种根中次生代谢物组成和含量的全面报道。因此,以野生芍药作为‘赤芍’的更换品使用存在很大的质量风险。
图1 中国原产野生芍药的种和亚种
本研究系统网络了中国原产的野生芍药7个原生种2个亚种共计20个居群的根样品。对样品举行预处理后,利用高效液相色谱串联四极杆航行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS)对芍药主根中的次生代谢因素举行定性分解,共检出21种重要次生代谢产品,划分属于单萜苷类化合物(monoterpenoid glycosides,8种)、酚类化合物(phenols,4种)、丹皮酚类化合物(paeonols,1种)、单宁类化合物(tannins,7种)和类黄酮化合物(flavonoids,1种)。
图2 在254 nm下芍药根中成果因素的高效液相色谱峰图
图3 芍药根中重要次生代谢物的化学结构
利用高效液相色谱二极管阵列检测器联用仪(HPLC-DAD)对所有样品中定性后的因素举行定量测定。各次生代谢因素的含量在不同样本之间存在显著不同。在单萜苷类化合物中,芍药组(section Paeonia)植物根中的指示性因素芍药苷(Paeoniflorin)的含量在多数样本中含量很高(0.549-39.29mg/g DW,下同),其中芍药(P. lactiflora)的芍药苷含量最高,变化幅度在56.26-77.80%之间。芍药新苷(Lactiflorin)在多数样品中含量低,甚至未检测到,但在优美芍药(P. mairei)的两个居群中含量划分是25.97 mg/g和17.48 mg/g,远高于其他样本。单宁类化合物在多数芍药根中含量较高,除芍药(只有9%)外,其他6个种根中单宁类化合物相对含量均跨越38%,其中川赤芍的4个居群相对含量跨越60%。
图420个野生芍药居群的根样品中5大类成果化合物的含量变化
利用21种次生代谢产品在各个样品中的含量作为变量对20个居群举行聚类分解用以正确形貌各个居群之间的不同性。根据根中次生代谢物的组成和含量将20个居群聚类为四个组,本研究中芍药(P. lactiflora)的四个居群聚为第二组(group2),优美芍药两个居群(P18和P19)聚类为第三组(group3),而在第一组(group1)中包罗毛叶草芍药、草芍药原亚种、川赤芍、新疆芍药和块根芍药居群,其中草芍药原亚种的两个居群和块根芍药居群开始聚为一组。
图5 野生芍药20个居群基于21种次生代谢物组成和含量不同聚类图
结论
本研究效果发现,除《药典》划定的芍药(P. lactiflora)和川赤芍可以做药用外,毛叶草芍药(P. obovata subsp. willottiae)、优美芍药、白花芍药(P. sterniana),多花芍药(P. emodi)部门居群的根中芍药苷含量高于《药典》划定的最小值。优美芍药根系中芍药新苷和总单萜苷类化合物含量均显著高于其他原生种,可以作为开发和提取芍药新苷和总单萜苷类化合物的潜在种质资本。其次,芍药(P. lactiflora)根中单宁类化合物重要为五没食子酰葡萄糖苷,六没食子酰葡萄糖苷和七没食子酰葡萄糖苷含量较低;川赤芍和优美芍药中以六没食子酰葡萄糖苷和七没食子酰葡萄糖苷为主,后期可以根据开发不同的成果性产品的需要来筛选合适的种质资本。第三,本研究还发现,草芍药原亚种和块根芍药根中单萜苷类和单宁类化合物这两类成果性因素含量显著低于其他样本,建议不作为开发药用资本的种质。最后,统一个种下的不同居群在次生代谢物的种类和含量上也存在一定不同,后期需要进一步研究发生这些不同的重要影响因素。
特别要强调的是,野生芍药多数种群处于极端濒危状态,不适互助为药用植物直接利用。本研究对中国原产所有野生芍药种类根中因素和含量举行了详尽分解,旨在挖掘可以作为药用的芍药属种质资本。后期的深度开刊利用,必须先保护后开发,在有用保护珍贵野生资本基础上再开刊利用,今后亟待成立野生种就地保育、人工仿野生种植基地,而非盲目无控制的采挖野生资本。
(博士生杨勇为论文第一作者,于晓南和王亮生为配合通讯作者,李珊珊和Jaime A. Teixeira da Silva参与了实验数据分解和论文修改)
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