芍药离体组织培育技术

芍药是我国闻名的观赏、药用植物，经过几千年的人工栽植选育，芍药优良品种的雄蕊、雌蕊大部门瓣化，结实率低，且由于异花授粉，种子也无法保持母本的优良性状。芍药繁殖重要以分株为主，繁殖系数低，给芍药产业化生长带来困难。芍药的离体培育研究现在做得较少，现将芍药离体组织培育方式介绍如下： 供试材料中，种子、胚和上胚轴选自单瓣品种‘罂粟子’昔时套袋成熟丰满的种子，茎尖选自重瓣型品种的休眠芽。 种子采集接种时间划分为8月、10月、1月、3月，培育基选用1／2MS固体培育基，遮光处理。种子胚根长至3厘米以上时置于冰箱中4℃冷藏30天，后转至日间25℃、夜晚18℃的地方。叶片睁开后举行芽增殖培育，光照每天12小时，光强1500至2000勒克斯。 试验效果显示，用芍药种子作为外植体应保留种皮。去除种皮的种子接种2周后极易褐变被污染而死亡。少数种子的胚根伸长0.5厘米，也出现生长截至、逐渐死亡的现象。去除种皮使种子的胚乳与培育基直接接触，易导致褐变。未去除种皮的种子在40天左右陆续裂口，长出胚根。 种子在试管中生根后，根生长缓慢，3个月未见上胚轴发芽展叶，且逐渐褐变死亡。而将发根后的试管苗置于冰箱中4℃冷藏，胚根生长加速，35天后上胚轴顶芽露出，转至组培室中。7天后子叶中心顶芽开始萌动，叶生长，20天后叶柄伸长睁开。一般一粒种子仅睁开一两片叶子，少数种子形成两个胚轴，睁开三四片真叶。 试验效果注释，以8月、10月、1月接种的种子成活率较高，需经过40至60天后才开始生根，经过低温处理，打破上胚轴休眠后多数能展叶。 芍药种子萌发的实生无菌苗生长缓慢，与自然界中芍药实生苗一样，只生长一两个叶片，无法延续生长。在所试的5种培育基上，不同时期的种子无菌苗均不能增殖和生长。切取无菌苗的上胚轴转接后，也不能分化出丛芽，重要显示为上胚轴对不同浓度的BA(细胞盘据素)、GA(赤霉素)均不敏感，生甜头于停滞状态，部门外植体基部发生褐变，部门芽尖、叶逐渐枯死。 胚与上胚轴的培育，接种至1／2MS＋BA＋0.2NAA(萘乙酸)和1／2MS＋0.5BA等培育基，pH值调至5.8。为防止褐变，每升添加50至100毫克维生素C，0.3％至0.5％活性炭，培育室温度25℃±1，每天光照10小时，光强2000勒克斯。 去除了胚乳的胚体积很小，仅两三毫米，接种在培育基上20天后子叶能在试管中睁开，胚根稍有伸长，但胚芽始终未见生长，转接至不同培育基效果相同。缘故原因很可能是种子胚乳中存在一定活性物质或胚中存在一定抑制物质，只有与胚乳和胚根配合生长，合成的某种促进物质或排除抑制物质可以协调内源激素关系，促进胚芽生长。 低温打破休眠后将上胚轴接种在培育基上。30天之后，叶柄伸长，叶睁开，较小，外面皱缩，比接种的种子无菌苗小，易发生褐变。培育基添加活性炭后，可显著削减褐变污染。幼苗形成后即出现生长停滞状态，转接含不同激素的培育基，变化不大。推测上胚轴生长后处于生理休眠期，休眠排除可能需要一个变温历程。茎尖培育一部门取地栽苗的休眠芽，剪取带芽鳞的茎尖举行试验，另一部门于9月下旬掘起植株，置于4℃湿土中，5周后取芽。除去芽鳞，切取茎尖，用0．1％次氯酸钠溶液消毒15分钟，无菌水冲洗3至5次，划分接种到以下3种培育基中： ①1／2MS＋0.5BA＋GA ②1／2MS＋1.5BA＋0.5KT ③1／2MS＋1.0BA＋0.5GA pH值5.6，蔗糖3％，琼脂0.8％，50毫克／升维生素C，培育室温度25℃±1，每天光照14小时，光强2000勒克斯。 不同取样时间对茎尖培育有影响。露地栽植取材时间在10月至11月，或于9月下旬掘起茎芽，置4℃冷藏处理5至6周，成活率和分化率较高。此时接种，休眠芽萌动，生长迅速，分化的试管苗结实。取材时间在2月，4℃冷藏8至9周的大部门材料芽鳞已经裂开，芽已伸长，消毒困难，污染率高。其他时间因芽的休眠尚未彻底排除，内部存在抑制物质，生长缓慢，成活率和分化率均较低。因此，茎尖培育的适宜取材时间应为10至11月或4℃冷藏5至6周。 从不同培育基对芽增殖的影响来看，BA和GA组合的培育基芽分化效果优于BA与KT组合。1.5BA＋0.5KT培育基中丛生芽、叶片数目较少，苗生长较高。在添加BA、GA的培育基中，丛生芽、叶片数目较多，苗壮。继代培育中，切取诱导芽单芽接种，35至40天后基部形成新芽。但随着代数增添，丛生芽和叶的数目逐渐削减，苗生长变弱，部门芽尖、叶枯死，出现白化苗。到第四代已基本转为玻璃苗、白化苗，褐变严重。芽增殖以1／2MS附加0.5BA和1.0GA为较佳培育基。